ELISA實(shí)驗(yàn)樣本處理基本步驟

　　ELISA實(shí)驗(yàn)樣本處理基本步驟

　　一、樣本類型與預(yù)處理

　　血清樣本?

　　采集后室溫靜置10-20分鐘自然凝固，2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，收集上清液。若保存后出現(xiàn)沉淀，需再次離心?。

　　避免溶血或脂血樣本，高脂血需稀釋或超濾處理?。

　　血漿樣本?

　　使用EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉抗凝，混合10-20分鐘后離心(2000-3000轉(zhuǎn)/分，20分鐘)，取上清?。

　　尿液/胸腹水/腦脊液?

　　無(wú)菌管收集，離心后取上清，沉淀需復(fù)離心?。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?

　　直接離心(2000-3000轉(zhuǎn)/分，20分鐘)收集上清;檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)成分需裂解細(xì)胞(如凍融法)后離心?。

　　組織樣本?

　　稱重后加入PBS勻漿，離心取上清，分裝后-20℃保存?。

　　二、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

　　保存條件?

　　短期(1周內(nèi))檢測(cè)可2-8℃保存;長(zhǎng)期需分裝后-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融?。

　　稀釋與干擾?

　　高濃度樣本需預(yù)實(shí)驗(yàn)確定稀釋倍數(shù)，避免超出檢測(cè)范圍?。

　　避免使用含裂解試劑的樣本(如RIPA)，可能干擾抗原-抗體結(jié)合?。

　　特殊樣本處理?

　　唾液/糞便?：需高速離心(4000×g)去除雜質(zhì)?。

　　全血?：抗凝后立即混勻，防止凝固?。

　　三、操作流程示例

　　樣本離心?：2000-3000轉(zhuǎn)/分，20分鐘，4℃或室溫(依試劑盒要求)?。

　　上清分裝?：按單次用量分裝，避免反復(fù)凍融?。

　　檢測(cè)前復(fù)檢?：離心去除沉淀，確保樣本澄清?。

　　四、常見(jiàn)問(wèn)題與解決

　　沉淀處理?：離心后仍渾濁可過(guò)濾(0.22 μm濾膜)或超濾濃縮?。

　　高背景值?：檢查樣本是否溶血或含高濃度脂質(zhì)，必要時(shí)稀釋?。

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