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熒光定量PCR耗材常見問題解答
以下是熒光定量PCR耗材(八聯管、96孔板等)的常見問題及解決方案，綜合實驗優化與故障排查要點整理：
一、耗材選擇問題
材質與透明度
問題：普通PP管導致熒光信號衰減或孔間串擾。
解決：優先選用醫療級聚丙烯(PP)材質，透明管(透明度>90%)適配TaqMan探針法，乳白色管可減少SYBR Green法的孔間干擾。
管蓋設計
問題：平蓋與凸蓋適配性差異導致密封不良或蒸發。
解決：凸蓋適合大體積反應(>50μL)，平蓋適配光學檢測儀器(如ABI 7500);凍干實驗需選雙層卡扣密封設計。
低體積反應異常
問題：死體積大導致低濃度樣本擴增失敗。
解決：選用0.1mL矮板或低容管(如384孔板)，減少蒸發并提高熱傳導效率。
二、實驗操作問題
擴增曲線異常
曲線斷裂/下滑：氣泡干擾光路或熱蓋壓力不均。需預離心去氣泡，對稱放置樣本平衡壓力。
“S”型曲線：模板降解或染料失效。建議分裝模板避免凍融，更換新鮮熒光染料。
重復性差(Ct值波動>0.5)
原因：加樣誤差或預混液未混勻。
優化：使用多通道移液器，預混液渦旋振蕩后分裝;定期校準移液槍。
熔解曲線多峰
非特異性擴增：引物二聚體或基因組污染。重新設計引物(GC含量40-60%)，DNase處理模板。
三、耗材適配性問題
儀器兼容性
問題：ROX校正染料與儀器不匹配導致基線漂移。
解決：選擇預混ROX的耗材，或根據儀器要求手動添加。
自動化流程故障
原因：耗材邊緣變形導致機械臂抓取失敗。
建議：使用全裙邊96孔板增強穩定性，避免高溫長期存儲。
四、特殊場景優化
高通量篩選：384孔板需搭配自動化分液系統，注意孔間溫控均一性(±0.1℃)。
低溫實驗：凸蓋管防凍裂，預冷耗材避免熱應力損傷。
| PCR系列（PCR管，八聯管，PCR板，封板膜） | ||
| BS-PCR-01D | 0.1ML 透明PCR單管 | 1000支/盒，10盒/箱 |
| BS-PCR-02D | 0.2ML 透明PCR單管 | 1000支/盒，10盒/箱 |
| BS-PCR-081-C | 0.1ML 透明PCR八聯管（含光學平蓋） | 125排/盒，10盒/箱 |
| BS-PCR-081-M | 0.1ML 乳白色PCR八聯管（含蓋） | 125排/盒，10盒/箱 |
| BS-PCR-082-C | 0.2ML 透明PCR八聯管（含光學平蓋） | 125排/盒，10盒/箱 |
| BS-PCR-082-M | 0.2ML 乳白色PCR八聯管（含蓋） | 125排/盒，10盒/箱 |
| BS-PCR-0102-CM | 0.1ml/0.2mlPCR 8聯排管蓋， 光學平蓋， 透明 | 125排/盒，10盒/箱 |
| BS-PCR-96-F02-C | 0.2ml 96孔PCR反應板 | 10塊/盒，20盒/箱 |
| BS-PCR-RFM | q PCR透明熱封膜 | 100張/盒 |
| BS-5R-250 | 凍干用PCR八聯軟管蓋 | 250條/包 |
| BS-D-250 | 凍干用PCR八聯管 | 250條/包 |
| BS-PCR-96-02-KS | 0.2ml透明可拆卸八聯管（含光學平蓋） | 10塊/盒，10盒/箱 |
| BS-PCR-082-LG | 0.2ML 透明PCR八聯管連蓋 | 125排/盒，10盒/箱 |
通過匹配耗材特性與實驗需求，可顯著提升數據可靠性。若問題持續，建議驗證引物效率或更換批次耗材。
注：以上資料僅供參考，如需更詳細操作視頻或技術指導，建議聯系供應商貨實驗老師獲取。
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